คำถามและคำตอบทั่วไปในการจัดทำสารละลายกัวนิดีนไธโอไซยาเนต

Guanidine thiocyanate เป็นสารลดสภาพโปรตีนที่แข็งแรง มันไม่เพียงแต่สามารถละลายโปรตีนได้อย่างรวดเร็ว ทำให้เกิดการกระจายตัวของโครงสร้างเซลล์ และแยกโปรตีนนิวเคลียร์ออกจากกรดนิวคลีอิกอย่างรวดเร็วอันเนื่องมาจากการทำลายโครงสร้างทุติยภูมิ แต่ยังส่งผลต่อการเสื่อมสภาพอย่างรุนแรงต่อ RNases ดังนั้น กัวนิดีน ไธโอไซยาเนตจึงสามารถใช้เป็นดีเนเจอร์แรนต์ในการสลายเซลล์ แยก RNA ออกจากโปรตีน และปล่อย RNA ลงในสารละลาย อย่างไรก็ตาม ปัญหาบางอย่างมักพบในการเตรียมและการใช้สารละลายกัวนิดีนไธโอไซยาเนต บทความนี้จะตอบปัญหาเหล่านี้ทีละคน

จำเป็นต้องใช้และเตรียมสารละลาย guanidine thiocyanate หรือไม่?

ความเข้มข้นสุดท้ายของ guanidine thiocyanate คือ 4m เป็นตัวอย่าง: โซเดียมซิเตรต 42 มม., 0.83% n-Lauryl sarcosine (โซเดียม dodecyl, n-methylglycine), 0.2 มม. β- การเตรียมบัฟเฟอร์ CSB จากเมอร์แคปโตเอธานอล กัวนิดีนไธโอไซยาเนต 25 กรัมและสารละลายบัฟเฟอร์ CSB 33 มล. ผสมจนละลายหมด สารละลายที่ทำให้เสียสภาพสามารถเตรียมได้โดยการให้ความร้อนและละลายที่65℃ และเก็บไว้ที่ 4℃ สำหรับการสแตนด์บาย

ดังนั้นตอนนี้ไม่จำเป็นต้องใช้และเตรียมสารละลาย guanidine thiocyanate และปัจจุบันมีสารละลายที่มีความเข้มข้นต่างกัน แต่เวลาในการจัดเก็บไม่ง่ายที่จะนานเกินไปมิฉะนั้นจะมีการตกตะกอนซึ่งจะต้อง ตรวจสอบอย่างรอบคอบก่อนใช้งาน นอกจากนี้ หากมีการเตรียมครั้งเดียวมากเกินไป แนะนำให้แพ็คใหม่

สารละลายกัวนิดีนไธโอไซยาเนตจำเป็นต้องผ่านการฆ่าเชื้อหลังการเตรียมหรือไม่?

ไม่จำเป็นต้องฆ่าเชื้อสารละลาย guanidine thiocyanate ซึ่งไม่เสถียรมากและโดยทั่วไปจะใช้น้ำ DEPC 0.1% กับสารละลายไพโรไลซิสและน้ำได้รับการฆ่าเชื้อแล้ว นอกจากนี้ รีเอเจนต์ทั้งหมดสำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอต้องเตรียมด้วยน้ำ DEPC และรีเอเจนต์ควรเปิดใหม่และใช้สำหรับอาร์เอ็นเอโดยเฉพาะ

แม้ว่าไลเซทที่เตรียมไว้จะไม่จำเป็นต้องผ่านการฆ่าเชื้อ แต่ควรสังเกตว่าผลิตภัณฑ์พลาสติกที่ใช้ในการทดลองได้รับการทำเครื่องหมายว่าปลอดสาร RNase หากยังไม่ได้เปิดใช้ก็สามารถใช้งานได้โดยตรง อื่นๆ ต้องได้รับการบำบัด: เพิ่ม DEPC ลงในน้ำกลั่นสองครั้งเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้าย 0.1% แช่ผลิตภัณฑ์พลาสติกในนั้น ระบายอากาศในครัวค้างคืน แล้วปิดผนึกด้วยอลูมิเนียมฟอยล์ อุณหภูมิสูงและฆ่าเชื้อด้วยความดันสูงเป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที แห้งและสแตนด์บาย